双孢菇三级菌种规范制作技术

原料处理

牛粪破碎处理后过筛，按1:1.2加水拌匀，堆积发酵，每天翻堆一次，约20 天左右，牛粪粉变为褐色、具有正常发酵草料的清香气味，晒干备用。未受潮的小麦，充分泡透后捞出，适当遮阳、通风，发现表皮发干时，轻喷细雾湿润，24 h后即可发芽，待麦芽长至1 cm~2 cm长时，即可使用。如果有虫蛀麦粒，也可使用，但虫蛀后的麦粒有孔洞，淀粉易流出，所以，必须多清洗几遍。然后倒入pH值8～9的石灰水中，浸泡6 h后煮20 min左右，至麦粒无白心时，捞出麦粒，冷水冲洗后即可。
 

基本配方

麦粒（以干品计）100 kg，牛粪粉30 kg，石膏粉1 kg，碳酸钙1.5 kg。
 

基质混合

将麦粒与牛粪粉按1∶0.2比例混合，并同时拌入其他辅料，注意使牛粪全部黏附到麦粒上，水分不足时适量喷水。剩余牛粪粉待用。
 

装瓶操作

一般小批量生产多不采用标准瓶，而利用酒瓶、葡萄糖玻璃瓶等，装瓶灭菌。为降低生产成本， 可用5 0 0 mL输液瓶。先装一把牛粪粉在瓶底，约1.0 cm～1.5 cm厚，再装麦粒，装瓶时稍墩瓶，使麦粒至瓶肩以下1 cm处，然后，再装入1 把~2 把牛粪粉，并用“L”形工具将之摊平、压死，之后塞入棉塞。
 

灭菌冷却

采用高压灭菌方法，压力维持在0.15 MPa，保持2.0 h～2.5 h。灭菌结束后，压力下降至0后，可取出料瓶，移入冷却室或接种室，室内提前3 天清理干净，并喷洒百病傻溶液；至料瓶降温至30 ℃时即可接种。

接种操作

室内喷洒一遍赛百09溶液后，将原种用75%酒精擦洗1 次，打开接种净化机， 1 0 m i n 后即可开始接种操作。每瓶（500 mL）原种可接40 瓶以上。
 

发菌培养

培养室（棚）提前清理卫生，地面灌水，地毯式喷洒百病傻溶液，密闭2 天后，地面撒施石灰粉，即可将接种后的菌种移入。发菌期间，尽量控制温度在25 ℃左右，不超过28 ℃，安装水温空调的最低可降至2 2 ℃左右。一般农户不具备条件，可采用土法降温：发菌棚内地面上用砖码起20 cm高，铺上新塑料膜，将菌种瓶立式排入，灌入地下水，每天换水1 次～2 次，即可使菌瓶内保持25 ℃以下。每3 天左右喷洒一次药物以作预防，可采用百病傻与赛百09交替；发现有菇蚊类成虫时，随即喷施高效氯氰菊酯予以杀灭。
 

剔杂处理

接种后第3天，即开始检查剔杂，发现任何非双孢菇菌丝的菌瓶，随即移出室外，有链孢霉污染的，应用方便袋从上往下套住菌瓶，慢慢移出。对一般杂菌的污染，可喷施药物后将料倒出，晒干后再次利用。对链孢霉污染，应远离培养室倒料，并予焚烧或深埋，空瓶用70 ℃以上热水烫杀，洗净后再用。
 

暂时保存

经35 天～45 天，菌种完成发菌，暂时不用的菌种，应予低温存放，一般保持2 ℃～4 ℃条件即可。
 

质量检验

双孢菇的菌丝浓白、清晰， 生长有力， 呈扇形生长， 绒毛状菌丝多， 整齐， 气生菌丝洁白。现在采用最多的“2796”属半气生型品种，其菌丝旺盛、一致。没有黄白色厚菌被；菌丝浓白粗壮，遇高温时微黄、可出现少量束状菌丝，上下均匀一致。

瓶内菌丝生长不健壮、呈散乱状态，或有“退菌”、“断菌”现象，料转色、结块或干缩，出现白色、浅黄色圆形块状物或不规则暗斑，有杂菌和螨类滋生，无蘑菇香味，具漂白粉或腥臭味等，均为不合格菌种。若菌丝呈淡黄白色，且菌丝萎缩，生长无力，或生长中就有菌被形成，则为培养基较湿或较老的菌种；菌种瓶内上部菌丝收缩变干，下部菌丝生长尚好，为培养基过干，培养温度过高；如果生长不均匀，表明麦粒浸泡和预煮时间不够；若生长中菌丝渐变黄，表明培养温度过高；若菌种瓶内上方出现很厚的菌被，是生产性能差或生理性状老化的菌种，不宜使用。一直在高温条件下培养的菌种，播种后不易吃料，发菌慢。