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草莓花药培养中外源激素浓度配比选择试验
■ 陆志平，钟灼仔，周寒松，张素芳（福建宁德职业技术学院 355000）
宁德是福建省草莓主产区，栽培面积约660hm2，品种单一（多为丰香），连续种植年限有20多年，植株受病毒侵染严重。感病后植株出现个体矮化、叶片变小、心叶黄化、畸形果多、果实变小、产量下降及品质变劣等特征，最终导致草莓品种的种性退化，难以表现原有的品种特征特性，给草莓生产带来巨大的损失，阻碍了草莓生产的可持续发展。据了解，目前尚未找到一种能加以根除的药物，惟一有效的途径是利用组培技术获得无病毒的草莓植株。实践证明，草莓花药培养获得无病毒植株的几率高，并可大量繁殖供定期更换种苗。国外发达国家以往3~4年更换一次草莓无病毒苗，现在几乎每年更换一次，中国南方种植草莓最好2~3年更换一次。这样才能延长优良品种使用年限，保持优良特征特性提高栽培效益。为此，2004年笔者进行了本试验，旨在选择培养基中最适合的植物激素种类与浓度配比，培养出更多的草莓花药愈伤组织再生二倍体无病毒完整植株，以供当地生产需要。
1 材料与方法
1.1 供试材料
试验在宁德职业技术学院组培室进行；草莓品种为丰香，来自于福安溪柄镇山村生产园，以草莓实生苗单核期的花蕾为外植体，经过严格消毒取其花药；基本培养基为MS，外源激素有6-BA、NAA、IBA三种，蔗糖30g/L和20g/L二种、琼脂8g/L；培养器皿采用圆形培养瓶。
1.2 试验方法
每个试验接种15瓶，每5瓶为一小组，重复3次，采用随机试验区组排列进行培养。
1.2.1 实生苗的花药诱导分化培养
在温度为（24±2）℃、日光灯照18h/d、光照度3000Lx的条件下，以MS+蔗糖30g/L+琼脂8g/L为基础，分别添加6-BA浓度为1mg/L、2mg/L、3mg/L和NAA浓度为0.1mg/L、0.2mg/L、0.3mg/L不同配比的培养基，pH为5.6~5.8。对草莓实生苗的花药进行培养，每瓶接种花药30粒，观察花药诱导分化率。
1.2.2 继代增殖培养
在温度为（24±2）℃、日光灯照12h/d、光照度1600Lx的条件下，以MS+蔗糖30g/L+琼脂8g/L为基础，分别添加6-BA浓度为0.3mg/L、0.5mg/L、0.7mg/L和NAA浓度为0.03mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L不同配比的培养基，pH值5.6~5.8，把诱导分化出来的草莓小芽、小苗转接入，进行继代增殖培养，每瓶接芽12个，观察芽的分化率。
1.2.3 无根苗的壮苗生根培养
在温度为（24±2）℃、日光灯照12h/d、光照度1600Lx的条件下，以½MS+糖20g/L+琼脂8%为基础，分别添加NAA浓度为0.03mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L或IBA浓度为0.03mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L配比的培养基，pH值5.6~5.8，将3cm以上的无根苗切下（注意切时尽量要取单独的芽，避免数芽丛生），接种于该培养基上（每瓶接小植株12株）培养2周后，观察根的粗壮度、平均根数，并计算生根率。
2 结果与分析
2.1 不同浓度6-BA、NAA配比培养基对草莓花药诱导分化率的影响，结果如表1。从表1看，9种配比培养基中均可诱导出苗，但5号配比培养基诱导草莓花药分化率最高为77.8%，其次是4号为70%。经方差分析，5号配比极显著高于7号和9号，显著高于2号、8号、1号和3号；而4号配比仅显著高于7号和9号，与其它配比间无显著差异。说明5号配比培养基是草莓花药诱导分化最适合的培养基。
2.2 不同浓度6-BA、NAA配比培养基对草莓芽分化率的影响，结果如表2。从表2可以看出，9种配比培养基中幼苗均可生长，但5号配比培养基草莓芽分化率最高为86.1%，经方差分析，5号配比显著高于9号、3号、1号和7号；而其它配比培养基对草莓芽分化率均无显著差异。说明5号配比培养基是草莓芽分化最适合的培养基。
2.3 不同浓度IBA、NAA对诱导草莓生根率的影响，结果如表3。从表3可见，1号配比培养基诱导草莓生根率最高为98.2%，经方差分析，1号配比显著高于2号，极显著高于3号、4号、5号、6号。说明1号配比培养基是诱导草莓生根最适合的培养基。
3 小结与讨论
三年来，通过对草莓品种（丰香）花药诱导分化培养、继代增殖培养和小苗生根培养的试验观察。结果如下：
3.1 实生苗的花药培养诱导分化：试验观察发现，在6-BA与NAA不同浓度配比的培养基中，接入花药培养7天后，花药变褐后转绿，并伴有轻微膨大；培养2~3周后，大部分花药变绿膨大，并发生愈伤组织，同时芽体突起，直接分化成小苗；培养3~4周时间，开始陆续抽发丛生芽；培养5周左右时间，不仅有大量花药诱导成愈伤组织或直接分化成芽，同时发生丛生芽并长成丛状苗；但以5号的诱导分化质量最高。如果6-BA浓度低于2mg/L，对花药细胞的分裂起不了作用且不发芽；如果6-BA的浓度高于2mg/L，形成的芽丛生长会停滞呈莲花座状。同时NAA的浓度高于0.2mg/L，会使芽长高且细小，易折断不易形成丛生芽；而NAA的浓度低于0.2mg/L，不易形成植株或形成的植株矮小且成丛状； 只当NAA的浓度为0.2mg/L时，不仅可诱导受伤的组织表面一至数层的细胞恢复分裂能力，而且还能再生愈伤组织形成不定芽。所以说最适合草莓花药诱导分化的培养基配方为：MS + 6-BA 2mg/L + NAA 0.2mg/L + 糖30 g/L +琼脂8% 。日照18h/d，光照度3000Lx。
3.2 继代增殖培养诱导芽分化表现：把诱导分化出来的草莓小芽、小苗转接入不同浓度的6-BA与不同浓度的NAA配比的培养基中，同时注意接时把芽团分细小些（约3~5个芽为一接材），进行分组对比试验。试验发现不同浓度的NAA对草莓芽分化影响不明显。而当6-BA浓度为0.5mg/L时，三种配比的苗粗、细中等，色较绿且健状，有小苗，且年增殖率高，侧芽增殖数量多，长势强、苗壮，但这其中又以5号配比的分化苗质量为最高。 当6-BA浓度为0.7 mg/L或0.3mg/L时，苗较粗、较脆、色较浅，有出现小苗和玻璃化苗，苗的长势长相均不好。因此，可以认为草莓继代增殖培养最适合的培养基配方为：MS+6-BA 0.5/L +NAA 0.05mg/L+糖30g/L+琼脂8%。日照12h/d，光照度1600Lx。在继代增殖培养试验中，还发现当6-BA浓度为0.5mg/L一直保持不变的情况下，连续多次继代增殖培养后（尤其在高峰期后），分化苗长势减弱、出现叶黄、茎变细等现象。故此，认为继代次数一般不超过10次。大量培养时，需要重新取新材料接种，得到新的分化值。
3.3 无根苗的壮苗生根培养诱导：试管苗根系生长的好坏是组培苗移栽成活高低的关键。试验发现：三种NAA不同浓度或三种IBA不同浓度配比的生根培养基中均能诱导生根。但在添加不同浓度IBA的培养基中，所诱导的草莓根十分纤细且根数较少；而在添加不同浓度NAA的培养基中，所生的根数量较多且粗壮，因此，认为NAA不同浓度比IBA不同浓度对草莓生根诱导效果更好。但在试验中又发现，NAA不同浓度能够显著促进试管苗的生根和植株的生长，同时又能抑制根的伸长。当浓度增至为0.1mg/L时，其抑制作用达到最明显，并且随着NAA浓度继续增加，试管苗基部愈伤组织化程度越来越严重，大大影响了试管苗移栽的成活率；当浓度低至为0.03mg/L时，其促进作用又呈不明显，试管苗所生的根变短，地上部生长也减弱；而只有当浓度为0.05mg/L时,试管苗基部愈伤组织化程度很轻微,所生的根数量多且粗壮，地上部生长旺盛，移栽成活率也高。因此，认为最适合草莓试管苗的生根诱导培养基配方为：½ MS+ NAA 0.05mg/L+糖20g/L+琼脂8%。日照12h/d，光照度1600Lx。
