白背三七组织培养技术

0 引言

【研究意义】白背三七［Gynura divaricata（L.）DC］为菊科三七草属植物，又名白背三七草、白背菜、富贵菜、鸡菜、大肥牛、叉花土三七、菊三七等，中药名为白背土三七（或白三七草），分布于我国台湾至华南、西南一带，喜生于潮湿的荫地上（广东植物研究所，1974）。白背三七的根、茎、叶均可入药，其根味甘、凉，具有清热凉血、散淤消肿的功效，主治支气管炎、肺结核、崩漏、痈肿、烫伤、跌打损伤、刀伤出血等（刘娟等，1997）；其茎、叶性味咸、微辛、寒、有毒，具有清热、舒筋、止血、驱痰的功效，主治百日咳、风湿痛、骨折、创伤性出血、痈肿疮疖等（胡勇等，2006；李丽梅等，2008；王津江等，2009）。白背三七是优良的药食两用植物。近年来，随着人们对白背三七药用价值和食用价值认识的提高，对其采摘数量逐年增加，但其普通扦插繁殖长势缓慢，难以满足迅速培育优良种苗的要求。通过组织培养技术，可以提高各种观赏和药用植物的繁殖速度（张丽琼等，2009，2011；陈刚等，2010；龚明霞等，2011；于金玲等，2011；翟晓巧等，2011；黄昌艳等，2011），满足对种苗的需求。【前人研究进展】黄余磊等（2011）对白背三七草进行组培研究，认为叶片、叶柄和茎段切口处均能产生愈伤组织，带芽茎段还能诱发丛生芽。陈贤兴（2002）、胡勇等（2006，2007）、姜曼花等（2008）、李丽梅等（2008）和王津江等（2009）主要研究了白背三七地上部分的化学成分及药理作用、多糖与黄酮的提取以及生物碱的检测等。但前人较多的研究均是围绕白背三七的成分，对于种苗繁殖方面研究不多。【本研究切入点】以白背三七的带腋芽茎段为外植体，建立外植体芽诱导和增殖、生根体系，能为大批量繁殖白背三七组培苗奠定基础，从而解决白背三七扦插繁殖的种质不纯、来源复杂、植株产量较低的问题，为白背三七工厂化无性繁殖提供新途径。【拟解决的关键问题】利用0.1%升汞为灭菌剂，探讨不同激素配比对白背三七丛生芽、生根诱导的影响，筛选白背三七再生体系，为白背三七组培快速繁殖提供参考。
 

1 材料与方法

1. 1 试验材料

供试外植体采自广西药用植物园种质资源圃的白背三七植株幼嫩茎段。

1. 2 试验方法

1. 2. 1 材料处理取白背三七的幼嫩茎段，在含1%洗衣粉的洗涤液中浸泡5~8 min，于自来水下冲洗20min。在超净工作台上用75%酒精消毒10~40 s，无菌水冲洗3次；0.1%升汞灭菌7 min，再以无菌水冲洗5次。用无菌滤纸吸干材料上的水分，选择不变色、无褐化的茎段横切成0.8 cm×1.2 cm 的带芽小块，供接种用。
1. 2. 2 培养方法将白背三七接种在启动培养基

MS（含26 g/L蔗糖、5.0 g/L琼脂，pH 5.8）+2.0 mg/L6- BA上进行诱导培养；3周后，选取健康无菌的新萌发茎段接种于添加不同激素组合（0~0.1 mg/L 6- BA、0~0.2 mg/L KT、0~0.2 mg/L 2，4- D）的MS培养基（均含26 g/L蔗糖、5.0 g/L琼脂，pH 5.8）中进行增殖培养，每处理20瓶，每瓶接种3个茎段，培养20 d后统计增殖系数。将获得的有效不定芽（株高1.5~2.0 cm）接种于MS

培养基上进行壮苗培养，培养20 d后转入添加0~0.4mg/L IBA和0~0.4 mg/L NAA的生根培养基中诱导生根，15 d后统计生根情况。

1. 2. 3 培养条件培养温度为（25±2）℃，光照时间为12 h/d，光照强度为2000 lx。
 

2 结果与分析

2. 1 不定芽的诱导与增殖

将带芽茎段接种于增殖培养基中，经过2~3周培养可诱导形成大量丛生芽。由表1可知，在未添加任何激素的1号基本培养基中，芽增殖系数最低，芽较细弱且生长缓慢，出现轻度玻璃化。在4号培养基MS+0.5mg/L 6- BA+0.2 mg/L KT+0.2 mg/L 2，4- D中，丛芽增殖系数最大，达15.4左右，明显高于未添加2，4- D的2号培养基，两者芽均生长粗壮、长势良好。5号培养基中芽也粗壮、长势良好且有少量愈伤组织，但增殖系数比4号培养基低，说明在添加相同KT、2，4- D的条件下，添加过高的6- BA会影响其增殖和愈伤组织的形成；而在相同6- BA、KT的条件下，添加2，4- D明显影响芽的增殖。