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‘白仙女’的组织培养与快速繁殖*
陈继敏，高 铤，邓 樱，杨镇明，蓝伟泉（广东省珠海市农业科学研究中心 519000）
‘白仙女’（Degarmoara Winter Wonderland）是兰科德加莫兰属（Degarmoara=Dgmra.）多年生常绿草本植物。德加莫兰属是由长萼兰属（Brassia）、堇花兰属（Mil tonia）、齿舌兰属（Odontoglossum=Odm.）三属间杂交而成，先以Brassia×Miltonia 得到Miltassia Cartagena（=Mtssa. Cartagena），再以Miltassia Cartagena×Odm. Gledhow，并从中筛选出‘白仙女’品种，1989年由Bee Lian注册。‘白仙女’为总状花序，花梗着生4 朵~6朵花，无分枝，花白色。背萼和侧萼同形，6 cm ~8 cm，长披针状，近花中央处有紫褐色斑点；花瓣6 cm ~8 cm，较萼片宽，边缘波浪皱褶，斑点较萼片细而少；唇瓣宽大呈裙摆状，边缘波浪皱褶，近花中央处黄底间紫褐色斑点。整花外形犹如身穿白色婚纱的少女在翩翩起舞，极具动感和美态，因此美其名曰‘白仙女’。
植物材料
‘白仙女’幼芽。
培养条件
腋芽启动培养基： ^ MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1+抗坏血酸25+柠檬酸25。
原球茎诱导培养基：❷ MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1。
原球茎增殖及丛生芽诱导培养基：❸ 花宝1号2 g/L+MS（除大量元素外其余全量）+5%香蕉。
壮苗及生根培养基：❹ 花宝1号2 g/L+MS（除大量元素外其余全量）+5%香蕉+0.2%蛋白胨、❺ 花宝1号2 g/L+MS（除大量元素外其余全量）+5%香蕉+0.2%蛋白胨+NAA 0.2。
上述培养基均加入0.52%琼脂粉，3%白糖，pH值5.5。培养温度为25 ℃±2 ℃，光照时间10 h/d，原球茎增殖阶段光照强度为1 8 μmol/（m2· s ） ， 壮苗生根阶段光照强度为36 μmol/（m2·s）~45 μmol/（m2·s）。
生长与分化情况
无菌材料的获得
在无病虫害的母株上用消过毒的刀片切取3 cm~5 cm的幼芽，最好选择健壮、叶片未展开的芽体，用洗衣粉轻轻刷洗表面，再用清水洗净。将外围叶片一层层剥离，剩下0.5 cm长的嫩叶不剥离。芽体直径约1.0 cm，高1.0 cm，呈圆锥状，每层均有一个腋芽。用10%的次氯酸钠溶液浸泡10 min，无菌水冲洗3 次~5 次。切去末端接触消毒液的部分，但不能切得太深，否则外植体材料容易坏死。接于❶号培养基上，黑暗培养5 天。由于芽体会分泌出黄色汁液，使基质严重褐化，在培养基中添加抗氧化剂有利于新芽的长出。
顶芽及腋芽的启动
经15 天的培养，顶芽及腋芽均有转绿的迹象。再过15 天，顶芽及腋芽长成0.5 cm高、0.2 cm粗的圆锥状，呈绿色。等芽体长成1.0 cm高、0.5 cm粗时，把顶芽及腋芽从母体上单独切下，并将芽体上半部切去，保留生长点，将此材料接于❷号培养基上。从外植体上直接产生原球茎的情况较少见。
原球茎的诱导与增殖
顶芽及腋芽在❷号培养基中，接触培养基的组织逐渐开始膨大，颜色从绿色变成黄白色，此阶段为愈伤组织的形成阶段，体积增大为原来的10 倍，时间较长，约需要30 天。此后，进入原球茎形成阶段，从黄白色的愈伤组织表面，有绿色小点散布，并逐渐长大成黄绿色的原球茎。将原球茎以“十”字方式纵切成0.5 cm×0.5 cm的小块，接种于❸号培养基中，增殖周期为20 天，增殖系数为8~10。对原球茎的转接必须及时，若长时间不转接，原球茎分化成丛生芽，可以把上部叶片横切去留下基部，同样接于❸ 号培养基中，但原球茎增殖率会大大降低。
丛生芽的诱导
取已增殖的原球茎，不必切割，直接接种于❸号培养基中，各材料之间预留足够的位置。经一个月的培养，原球茎分化成丛生芽，长势旺盛，1 cm2的材料约长出15 株苗，高约2 cm，3 片~4 片叶子，个别已有1 条~2 条0.5 cm~1 cm长的根，各植株之间以类似下胚轴的部分相连，极易进行分株处理。
壮苗、生根培养及移栽
将丛生芽单独分离开，分别接种于❹、❺号培养基中，500 mL兰花瓶中可接20 株。壮苗最初的30 天，苗的生长存在一定的停滞，长势远远比不上丛生芽阶段，可能与其群体效应有关；之后的30 天，叶片和根都有明显的增长，苗长高至6 cm以上，❹号培养基的根3 条~4 条，长约4 cm，生根率达90%以上，❺号培养基的根5 条~6 条，长约6 cm，生根率高达98%。均可炼苗并移栽。移栽时，将小苗取出，清理根上的基质，用已消毒的水苔包裹根部栽于1.5 寸（约3.8 cm）胶杯中即可，小苗不需消毒处理。移栽初期在阴凉通风处培养，温度保持20 ℃~25 ℃，50%的自然光处理，每天喷雾，成活率接近95%。据观察，在❺号培养基中生长的根数和长度均比❹号好，但经移栽种植后区别不显著。值得注意的是，‘白仙女’通过花期调控，可在春节期间整齐开花，该品种在珠海市农业科学研究中心2006年、2007年宵花销售中备受客户青睐，是继蝴蝶兰、大花蕙兰等之后的热销品种。由于‘白仙女’为三属间杂交品种，通过有性繁殖方法不能稳定遗传；用常规的分株法繁殖系数太低，不能满足市场的需求；现通过组织培养方法可大大提高‘白仙女’的繁殖速率，并可获得大小、性状一致的组培苗。本文建立的组培体系，除能提供大量优质种苗外，还为珠海市农业科学研究中心“热带洋兰种质资源圃”品种的保存起到积极的意义，也为属间杂交兰花的组培与保存提供参考依据。‘白仙女’的组织培养国内外未见报道，其亲本属的组织培养国内也未见报道。■
